1996年，来到北京的郑佳欣接拍第一部电视剧《梦醒五棵柳》，在剧中演一个东北农村女孩，该剧获得了飞天奖，她也因此开始了演艺之路。

1998年4月，参与拍摄古装清朝喜剧《还珠格格》，饰演抛绣球相亲的杜家小姐杜若兰；同年，出演历史剧《戊戌风云》。

1999年，出演古装武侠剧《小李飞刀》，饰演冷艳媚人的美人林仙儿，并开始受到大众关注。2000年，与王学圻、何赛飞合作主演都市情感剧《爱是阳光》，在剧中饰演放荡的反叛女孩李冠英。2002年，与洪金宝合作主演警匪剧《特警飞龙》，饰演美艳阴毒的黑社会女老大倪虹。

2004年1月，主演惊悚动作片《古宅魅影》；2月，与王刚、王思懿合作主演的古装历史剧《倚天钦差》在央视播出，她在剧中饰演胭脂一角。

2005年1月，与周浩东合作主演剧情片《西域情仇》；5月，出演家庭伦理剧《哑巴新娘》，饰演性格坚强叛逆的青楼女子苏凤 ；12月，出演爱情奇幻电影《情癫大圣》，在片中饰演一位蜥蜴美女。

2007年，与俞小凡合作主演古装爱情剧《媳妇的眼泪》，在剧中一人分饰春喜和晓倩两个角色。

2010年，出演古装悬疑剧《龙行天下之糊涂县令妙钦差》，饰演乌夫人湘琴。2011年，出演古装武侠剧《龙游天下》第三部，再度与杜军泽饰演一对夫妻。2013年，郑佳欣出演的古装剧《龙巡天下之断臂观音》播出，她则在剧中饰演隐忍贤良的传统妇女心兰。

2015年，郑佳欣与“96明星班”首次合体，并集体出演都市轻喜剧《虎妈猫爸》。

2016年1月，与马少骅、关晓彤合作主演励志年代剧《搭错车》，饰演身陷“家暴”的返乡知青佟燕。随后，受邀出席中国青少儿短片艺术大赛颁奖典礼，为获奖选手开奖 。